泛亚电竞 MOPC小鼠少突胶质前体细胞培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：MOPC小鼠少突胶质前体细胞
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM+10%FBS+1%双抗
传代方法：建议首次1:2传代；传代后每2天更换培养基。

二、细胞处理流程

在收到细胞后，待其培养达到良好状态时，填满完全培养液并封好瓶口，确保细胞运输安全。收到细胞时，需用75%酒精对瓶外进行消毒，随后在超净台内进行操作。接着将细胞瓶放于37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，让细胞稳定状态后再处理。显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片是售后服务的重要依据，未拍摄照片默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，收集培养液到离心管中，留5ml完全培养基在37℃、5%CO2孵箱中培养。若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用无钙镁PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞状态，若大部分细胞变圆并脱落则迅速将其带回操作台，轻敲瓶子后添加5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打使细胞完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基中。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5%CO2细胞培养箱中继续培养。

b、细胞冻存

当细胞生长达到培养瓶面积的80%时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。然后添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，轻微倒置观察，当细胞收缩变圆时加5ml完全培养液终止消化。轻轻吹打细胞使之脱落后，转移到15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟。弃去上清后，将沉淀细胞加入1ml的泛亚电竞无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存；如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放至少24小时。

c、细胞复苏

取出液氮中的冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至完全融化后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟。弃去上清后，用5ml完全培养基重悬细胞，接种于T25培养瓶中，放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。第二天，换入新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在细胞运输过程中，部分细胞可能因贴壁不牢而脱落，此为正常现象。如脱落较多，需将培养液收集至离心管，在1000RPM离心5分钟后，收集上清作过渡培养，随后加入胰酶1-2ml，重悬并消化1-2分钟后，以5ml完全培养基终止反应，再离心，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基。按1:2比例进行分瓶传代，并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5%CO2细胞培养箱中继续培养。

五、售后条款

关于细胞出现问题的重发条款如下：

1. 运输过程中若细胞遭遇损坏、泄漏等问题可申请重发；
2. 如细胞存在污染问题，需在收到产品48小时内提供真实实验结果，验证后可重发；
3. 若常温发货细胞静置24小时后存活率低于80%，需提供细胞状态照片可申请重发；
4. 对于细胞活性问题，需要在收到产品7天内用台盼蓝染色法验证活力并提供结果以申请重发；
5. 收到细胞当天以及之后的2-3天内请保存照片，若超过3天未反馈则视产品合格。

以上条款旨在确保泛亚电竞 MOPC小鼠少突胶质前体细胞的安全和有效使用。如有任何疑问，请及时与我们联系。